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ProteoLiposome PLUS Expression Kit (CFS-EDX-PLUS-PLE)

厂家:天根生化科技(北京)有限公司
  目录号 规 格 价 格
CFS-EDX-PLUS-PLE 240 μl×8 rxn 9500元
产品简介

本系列试剂盒特别针对膜蛋白表达设计,能够通过质粒模板实现膜蛋白的少量表达。本系列试剂盒采用转录和翻译非偶联的方法,试剂盒中提供包含体外转录所需的酶、NTP和离子环境的Transcription PreMix LM,加入模板后先完成DNA的转录,再配合麦胚无细胞蛋白表达系统预混mix完成mRNA的翻译,该mix中包含蛋白翻译的所有必需酶类、各种tRNA和离子,另外含有特殊的脂质体,使目的蛋白能够在脂质体的生物膜上正确合成和组装。本系列试剂盒利用双层液相反应法(Bilayer)表达目的蛋白,每个反应蛋白表达量为10 μg左右,适合western blotCBB染色等蛋白检测实验和下游膜蛋白功能解析。此外,本试剂盒还可作为模板测试试剂,检测目的质粒能否成功表达目的蛋白。能够在本试剂盒表达成功的模板质粒,可直接应用于ProteoLiposome BD Expression Kit (CFS-PLE-BD)中,做大量膜蛋白表达使用。


产品特点

针对性强:含有脂质体,特别针对传统方法难表达、难组装的膜蛋白设计

操作简单:采用Bilayer 反应方法,不需要特殊仪器,只需加入模板即可进行反应

表达高效:一天内完成蛋白表达,蛋白表达量约为10 μg


储存条件

低于-70保存,避免长期存放于干冰环境,反复冻融不超过2次。


实验例


建议使用质粒模板进行蛋白表达。可以使用pEU系列质粒作为表达载体,将带有起始密码子和终止密码子的cDNA克隆至载体上,提取质粒后直接用于蛋白表达。亦可使用其他带有SP6启动子的表达载体进行蛋白表达,不要使用T7启动子。




蛋白翻译采用双层液相反应法(Bilayer Reaction Method),通过反应液和麦胚裂解物造成的密度差,相互渗透,在液面相交处发生反应。随着时间的推进,溶液逐渐由两相变为单一的混合物而终止。在下层液中加入脂质体(liposomes),蛋白可直接在脂质体上合成和组装。



使用ProteoLiposome PLUS Expression Kit表达膜蛋白——G蛋白偶联受体T1R1,使用考马斯亮蓝(CBB)染色检测(PAGE图)蛋白表达量。转录时间为371小时,翻译时间为154小时。结果显示,翻译4小时即可观测到膜蛋白表达。延长翻译时间蛋白得率更高,翻译20小时可达到最大蛋白表达量。

地址:北京市海淀区西小口路66号东升科技园(北领地)C7-3 电话:800-990-6057
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